专题资料（2021-2022年）39DNA重组技术的基本工具和基因工程的基本操作程序.doc

40 DNA 重组技术的基本工具和基因工程的基本操作程序

考纲要求　

1.基因工程的诞生 Ⅰ

2.基因工程的原理及技术 Ⅱ

复习要求

1．理解基因工程的实质

2．理解基因工程操作的四步曲及其操作实例

基础自查

一．基因工程的概念

。

（3）结果：产生的 DNA 片段末端通常有两种形式： 。

2. DNA 连接酶

(1)两种 DNA 连接酶（E·coliDNA 连接酶和 T

4-

DNA 连接酶）比较：

①相同点： 。

②区别：

（2）与 DNA 聚合酶作用的异同:

3.载体

２.PCR 技术扩增目的基因

（1）原理：

（2）过程：： 。

第二步：

1.目的： 。

2.组成：

（1）启动子： 。

（2）终止子： 。

（3）标记基因的作用：

。

。

第四步：

1.首先要检测 ，方法是采用 。

2.其次还要检测 ，方法是采用

。

3.最后检测 ，方法是 ，用 。

4.有时还需进行 的鉴定。如 转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。

课堂深化探究

一．对基因工程概念的理解

二．基因工程的基本操作工具

1．与 DNA 分子相关的酶

(1)几种酶的比较

(2)限制酶与 DNA 连接酶的关系

2．载体

(1)作用

(2)具备的条件

(3)种类

改造。

三．基因工程操作程序

基因工程技术生产凝乳酶的过程

1．基因工程的操作程序分析

(1)目的基因的获取途径

特别提醒　①插入的目的基因的表达需要调控序列，因而用作载体的质粒的插入基因部位之前需有启动子，之后需有终止子。

②两次使用的限制酶为同一种酶，这样形成的黏性末端碱基之间互补，便于连接。

(3)将目的基因导入受体细胞(转化)

特别提醒：1．在整个工程中，只有第三步将目的基因导入受体细胞过程中不发生碱基互补配对，其他步骤均发生配对。

2．切割质粒和目的基因的限制酶必须是同一种酶，以获得相同的黏性末端，利于基因表达载体的构建。

3．插入的目的基因只是结构基因部分，其表达需要调控序列，因而用作载体的质粒的插入部位前须有启动子，后须有终止子。

B．限制性核酸内切酶和 DNA 连接酶是两类常用的工具酶

C．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性

D．载体上的抗性基因有利于筛选含重组 DNA 的细胞和促进目的基因的表达

2.下列有关基因工程中限制性核酸内切酶的描述，错误的是(　　)。　　　　　

A．一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列

B．限制性核酸内切酶的活性受温度影响

C．限制性核酸内切酶能识别和切割 RNA

D．限制性核酸内切酶可从原核生物中提取

3.如图是利用基因工程技术培育转基因植物，生产可食用疫苗的部分过程示意图，其中 Pst Ⅰ、Sma Ⅰ、EcoRⅠ、ApaⅠ为四种限

制性核酸内切酶。下列说法错误的是(　　)。