荧光定量PCR仪（ABI7500）操作规程及日常维护

荧光定量PCR仪（ABI7500）操作规程及日常维护 本文介绍了荧光定量PCR仪（ABI7500）的操作规程和日常维护，旨在为用户提供指导和帮助。荧光定量PCR仪是一种高灵敏度和高 specificity 的检测技术，能够实时监测PCR反应过程，并对未知模板进行定量分析。 荧光定量PCR仪的原理是通过在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR过程。荧光染料法和荧光探针法是两种常用的荧光检测方法。荧光染料法中，荧光染料能特异性掺入DNA双链，发出荧光信号，而不掺入双链中的染料分子不发出荧光信号。荧光探针法中，探针的5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团，PCR扩增时，Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号。 在操作规程中，首先需要打开电脑显示器和电脑主机的电源开关，接着打开ABI7500仪器电源开关，并预热10分钟。然后，点击SDS软件，选择File-New-新建，输入反应板文件名，选择反应类型和探针，并指定探针和任务。接着，运行相应的反应类型程序，选择Instrument设定PCR条件，并点击Save保存设置。最后，按压仪器托盘上的按压位，将所需检测反应板放入检测孔位，并点击Start开始检测。 在结果分析中，PCR反应结束后自动保存结果，对扩增曲线进行分析，选择Analysis-AnalysisSettings，选择Auto Ct，软件自动为每个反应空生成基线和阈值。用户也可以根据分析后图像调节Baseline的Start值、End值、Threshold值，并点击Analyze进行再次分析。 在日常维护中，每周需要用无绒布块蘸取75%酒精清洁仪器的表面，每周使用75%酒精浸泡反应管托架，每月执行一次背景校准，每半年检查灯具状态，并在PCR仪运行之前或期间，7500 Software可能显示警告，按警告要求进行目标区（ROI）校正、背景校准、光学校准、染料校准、RNase P仪器验证试验等。 本文详细介绍了荧光定量PCR仪（ABI7500）的操作规程和日常维护，旨在帮助用户正确地操作和维护仪器，提高检测结果的准确性和可靠性。