苏州大学本科生毕业论文.doc

蛋白质工程、基因克隆、原核表达、蛋白质表达分析 本文主要介绍了家蚕 Serpin-2 基因的克隆、序列分析和原核表达研究。通过设计合适的引物，采用 PCR 方法克隆了家蚕 Serpin-2 基因，并对其序列进行了分析。结果表明，家蚕 Serpin-2 基因编码区长度为 990bp，编码 329 个氨基酸，相对分子量约为 43.75 kDa，等电点约为 4.67。与家蚕 Serpin-2 比较发现，两者基因序列相似度高达 99.29%，氨基酸序列相似度高达 98.93%。 在原核表达系统中，将家蚕大造 Serpin-2 基因克隆进原核表达载体 pET-28a(+)，转化到大肠杆菌 BL21 中，并经 1 mmol/L IPTG 诱导蛋白质表达。SDS-PAGE 电泳分析结果表明，经 IPTG 诱导转化家蚕 Serpin-2 的 BL21 菌与对照 BL21 菌、空 pET-28a(+) 转化 BL21 菌相比出现了一条特异性的蛋白质条带，相对分子量约 44 kDa，与预计的大小相符，证实家蚕 Serpin-2 在大肠杆菌中得到表达。 本研究结果为从分子水平上解析 Serpin 在野桑蚕体内的功能打下了基础，并为进一步研究 Serpin 的生物学功能提供了可能性。 知识点： 1. 基因克隆：通过设计合适的引物，采用 PCR 方法克隆了家蚕 Serpin-2 基因。 2. 序列分析：对家蚕 Serpin-2 基因的序列进行了分析，结果表明，家蚕 Serpin-2 基因编码区长度为 990bp，编码 329 个氨基酸，相对分子量约为 43.75 kDa，等电点约为 4.67。 3. 原核表达：将家蚕大造 Serpin-2 基因克隆进原核表达载体 pET-28a(+)，转化到大肠杆菌 BL21 中，并经 1 mmol/L IPTG 诱导蛋白质表达。 4. 蛋白质表达分析：SDS-PAGE 电泳分析结果表明，经 IPTG 诱导转化家蚕 Serpin-2 的 BL21 菌与对照 BL21 菌、空 pET-28a(+) 转化 BL21 菌相比出现了一条特异性的蛋白质条带，相对分子量约 44 kDa。 5. 蛋白质工程：本研究为从分子水平上解析 Serpin 在野桑蚕体内的功能打下了基础，并为进一步研究 Serpin 的生物学功能提供了可能性。 本文介绍了家蚕 Serpin-2 基因的克隆、序列分析和原核表达研究，为研究 Serpin 的生物学功能提供了基础。