子交换树脂)。被分离组分在色谱柱上分离原理是树脂上可电离离子与流淌相中具有相
同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆交换,依照各离子与离子交换基团具有不同的
电荷吸引力而分离。
缓冲液常用作离子交换色谱的流淌相。被分离组分在离子交换柱中的保留时刻除跟
组分离子与树脂上的离子交换基团作用强弱有关外,它还受流淌相的 pH 值和离子强度
阻碍。pH 值可改变化合物的解离程度,进而阻碍其与固定相的作用。流淌相的盐浓度大,
则离子强度高,不利于样品的解离,导致样品较快流出。
离子交换色谱法要紧用于分析有机酸、氨基酸、多肽及核酸。
4.离子对色谱法 又称偶离子色谱法,是液液色谱法的分支。它是依照被测组分
离子与离子对试剂离子形成中性的离子对化合物后,在非极性固定相中溶解度增大,从
而使其分离成效改善。要紧用于分析离子强度大的酸碱物质。
分析碱性物质常用的离子对试剂为烷基磺酸盐,如戊烷磺酸钠、辛烷磺酸钠等。另
外高氯酸、三氟乙酸也可与多种碱性样品形成专门强的离子对。
分析酸性物质常用四丁基季铵盐,如四丁基溴化铵、四丁基铵磷酸盐。
离子对色谱法常用 ODS 柱(即 C18),流淌相为甲醇-水或乙腈-水,水中加入 3~10
mmol/L 的离子对试剂,在一定的 pH 值范畴内进行分离。被测组分保时刻与离子对性质、
浓度、流淌相组成及其 pH 值、离子强度有关。
5.排阻色谱法 固定相是有一定孔径的多孔性填料,流淌相是能够溶解样品的溶
剂。小分子量的化合物能够进入孔中,滞留时刻长;大分子量的化合物不能进入孔中,
直截了当随流淌相流出。它利用分子筛对分子量大小不同的各组分排阻能力的差异而完
成分离。常用于分离高分子化合物,如组织提取物、多肽、蛋白质、核酸等。
被分离组分在柱中的洗脱原理
II.差不多概念和理论
一、差不多概念和术语
1.色谱图和峰参数
色谱图(chromatogram)——样品流经色谱柱和检测器,所得到的信号-时刻曲线,又称
色谱流出曲线(elution profile)。
基线(base line)——经流淌相冲洗,柱与流淌相达到平稳后,检测器测出一段时刻的流
出曲线。一样应平行于时刻轴。
噪音(noise)——基线信号的波动。通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳固、
流淌相含有气泡或色谱柱被污染所致。
漂移(drift)——基线随时刻的慢慢变化。要紧由于操作条件如电压、温度、流淌相及
流量的不稳固所引起,柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。
色谱峰(peak)——组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线。流出曲线上的突起部
分。正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线(高斯 Gauss 曲线)。不对称色谱峰有两种:
前延峰(leading peak)和拖尾峰(tailing peak)。前者少见。
拖尾因子(tailing factor,T)——T=,用以衡量色谱峰的对称性。也称为对称因子
(symmetry factor)或不对称因子(asymmetry factor)。《中国药典》规定 T 应为
0.95~1.05。T<0.95 为前延峰,T>1.05 为拖尾峰。
峰底—基线上峰的起点至终点的距离。
峰高(peak height,h)—峰的最高点至峰底的距离。
峰宽(peak width,W)—峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。W=4σ
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