分子诊断检验程序性能验证指南收集.pdf

分子诊断是利用分子生物学技术对疾病进行诊断的科学。它涉及到对DNA、RNA、蛋白质等分子水平的分析，用以检测疾病的遗传特征和生物标志物，从而为疾病的预防、诊断、治疗和预后评估提供帮助。由于分子诊断结果的准确性对于临床决策至关重要，因此对分子诊断检验程序进行性能验证显得尤为重要。 性能验证是验证分子诊断检验程序是否满足预定性能标准的过程。CNAS（中国合格评定国家认可委员会）发布的GL039指南，即《分子诊断检验程序性能验证指南》，为实验室提供了详细的验证方法和标准。在性能验证中，通常会评估多个关键参数，包括但不限于精密度、准确度、报告范围、检测限、特异性、敏感性和重复性等。 精密度是衡量检验结果的可重复性的指标，通常通过计算标准差或变异系数来评估。准确度则反映检验结果与真实值之间的接近程度，可以通过与已知浓度的标准品比较来确定。报告范围指的是检验方法可准确测定的分析物浓度范围。检测限是指能够被可靠检测到的最小浓度或数量，通常通过分析空白样本或低浓度样本来确定。特异性是指检验方法区分不同分析物的能力，而敏感性则指的是检验方法检出分析物的能力。 SNV（单核苷酸变异）和indel（插入或缺失）是分子诊断中常见的基因变异类型。SNV检测的是单个碱基对的变化，而indel涉及的是DNA序列中碱基的插入或缺失。CNV（拷贝数变异）是指基因组中较大片段DNA的拷贝数变化。这些变异的检测在遗传疾病、肿瘤诊断和个性化医疗等方面尤为重要。 在进行性能验证时，常用的分子诊断技术包括PCR（聚合酶链式反应）、Sanger测序、NGS（下一代测序）等。Sanger测序是一种传统的测序技术，可以提供高准确性但相对较低的通量。NGS技术则能够同时对大量的DNA片段进行测序，适用于基因组学和转录组学研究。 在实验室中，对于样本的核酸提取和纯度评估也是性能验证的关键步骤之一。通过测量A260/A280的吸光度比值，可以判断DNA和RNA样本的纯度。理想的DNA样本的比值通常在1.7至1.9之间，而RNA样本的比值则在1.8至2.0之间。Ct值是在实时定量PCR中用来衡量初始模板量的一个参数，Ct值越低表示初始模板量越多。 ISO15189是国际标准化组织发布的关于医学实验室质量和能力认可的标准，强调了医学实验室管理及技术操作中的质量要求，对于分子诊断实验室来说，遵循该标准也是至关重要的。 对于性能验证的数据分析和结果评估，需要科学和严谨的方法。例如，利用公式d/(b+d)×100%来计算特定分析物的检测阳性率，以及(a+d)/(a+b+c+d)×100%来计算特定分析物的总检出率。这些计算方法对于评估检验程序的敏感性和特异性具有重要的意义。 分子诊断检验程序的性能验证是一个复杂且多方面的过程，需要实验室在实施前进行细致的规划和准备。通过性能验证，可以确保检验程序具有足够的可靠性和重复性，为临床应用提供有力的支持。