标准操作规程（SOP）——禽流感病毒H5N1 NASBA检测.pdf

《标准操作规程（SOP）——禽流感病毒H5N1 NASBA检测》是一份详细的指导文件，旨在规范中国国家流感中心对疑似H5N1禽流感病例的标本进行快速、准确的检测。该规程涵盖了从样本处理到结果分析的整个流程，以确保检测的可靠性和生物安全性。 NASBA（核酸序列依赖性扩增）是一种快速等温核酸扩增技术，它结合了AMV逆转录酶、T7 RNA多聚酶、核糖核酸酶H和特异性寡核苷酸引物及分子信标探针，能在实时条件下监测反应过程。在检测过程中，样品检测信号值（WT signal）是指荧光信号强度，而阈值（threshold）是判断阳性或阴性的分界线，超过阈值则表示阳性。 规程中强调了操作的生物安全要求，如标本裂解需在BLS-3实验室进行，其他操作在BSL-2实验室执行，需遵守特定的生物安全规定。此外，规程还列举了所需的材料和仪器，包括梅里埃公司的Nulisens EasyQ检测分析系统、离心机、移液器、核酸提取Kit等。 实验步骤包括病毒核酸提取、反应体系配制、加反应模板以及反应检测。核酸提取参照RT-PCR方法；反应体系配制涉及质控设置，包括阴性对照、阳性对照和空白对照；酶的稀释和反应液的配制需要精确的体积控制；加反应模板时，要在生物安全柜内操作，确保样本和酶的混合均匀；在检测分析区，使用Nulisens EasyQ系统进行荧光信号读取和结果分析。 通过这份SOP，实验室操作人员可以遵循标准化流程，提高检测效率，减少误差，同时确保个人防护和环境安全，为H5N1禽流感的早期诊断和防控提供了有力支持。