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适宜浓度的维生素E促进半滑舌鳎生长激素基因的表达.docx
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适宜浓度的维生素E促进半滑舌鳎生长激素基因的表达.docx
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生长激素是一种由垂体前叶合成和分泌的多肽类激素, 能够不通过靶腺而刺激生长, 动员脂肪分解,
促进蛋白质的合成, 抑制葡萄糖的氧化, 提高对钾、钙、磷、硫等元素的利用
[1]
。相关研究表明生长激素
能够促进鱼类的骨骼生长与肌肉蛋白质的合成
[2]
。
维生素 E 又名生育酚, 最初发现时被认为是维持动物正常生殖所必需的一种脂溶性物质
[3]
。维生素
E 在鱼类生长、免疫功能等方面的研究已逐渐成为热点
[4,
5]
。摄食维生素 E 含量为 150 mg/kg 饲料的点带
石斑鱼(Epinephelus coioides), 其增质量率显著提高
[6]
。用添加维生素 E 的配合饲料投喂鲻鱼(Mugil
cephalus)幼苗, 能够有效地促进其生长
[7]
。关于维生素 E 如何调控鱼类的生长, 是否与生长激素有关, 至
今未见相关研究报道, 因此值得进一步探讨。尽管维生素 E 是重要的抗氧化剂
[8, 9]
, 但它还被证明可作为
基因的调节因子
[10]
。新近水生动物研究表明适宜浓度的维生素 E 能够促进大菱鲆促性腺激素基因的表达
[11]
。在陆生动物研究中指出, 饲料中添加 15 IU/kg 维生素 E 时, 蛋雏鸭血清生长激素含量显著高于对照组
[12]
; 此外, 青大麦叶提取物(已鉴定为 α-生育酚琥珀酸酯)可以促进体外培养的大鼠垂体前叶细胞分泌
GH
[13]
。因此作者假设维生素 E 通过基因调节的功能影响生长激素基因的表达。
半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)属鲽形目(Pleuronectiformes)、鳎亚目(Soleoidei)、舌鳎科
(Cynoglossidae)、舌鳎属(Cynoglossu), 为中国的本地种, 主要分布在中国的黄渤海域
[14]
。其体型大、生
长快、味道鲜美、高蛋白、营养丰富、经济价值高, 在中国的养殖规模也逐渐扩大
[15]
。半滑舌鳎与大菱
鲆、牙鲆(Parallichthys olivaceus)同为中国最具发展潜力的工厂化养殖和土池养殖的海水品种
[16]
。目前已
经开展了关于半滑舌鳎生长激素基因在大肠杆菌中原核表达的研究
[17]
, 以及半滑舌鳎生长激素基因的多态
性与生长激素及生长性状相关性的研究报道
[2]
; 此外, 在饲料中添加 1 200 mg/kg 的维生素 E 可以有效提
升半滑舌鳎亲鱼的繁殖性能
[18]
, 在饲料中添加 1 084.58 mg/kg 的维生素 E 饲喂半滑舌鳎幼鱼 84 d, 经迟
缓爱德华氏菌攻毒后, 能有效降低其红细胞的过氧化损伤
[19]
。而关于半滑舌鳎维生素 E 和生长激素关系的
研究未见报道。因此, 参照半滑舌鳎垂体细胞体外原代培养方法
[20]
, 借助养殖和细胞培养实验, 探究不同
含量的维生素 E 与垂体组织中(养殖实验)和垂体原代培养细胞中(细胞实验)gh mRNA 相对表达量之间的关
系, 初步讨论维生素 E 促生长的分子机制, 并为半滑舌鳎人工配合饲料的研制提供参考。
1 实验材料与方法 1.1 实验用鱼
实验用 120 条体质量为(464±2.6)g 健康的 1 龄半滑舌鳎雌性成鱼, 购自莱州明波水产有限公司(山
东, 莱州), 为当年孵化和培育的同一批鱼。
1.2 饲料制备与养殖管理
养殖实验的饲料中维生素 E 添加量是参照肖登元等
[18]
在半滑舌鳎亲鱼饲料中的添加量(0、200 和 1
200 mg/kg)报道以及作者的预实验结果进行设置。本实验设 3 个组, 每组设 3 个重复, 每组饲料中维生素
E 的添加量分别是 0、400 和 1 600 mg/kg。维生素 E 以 DL-α-生育酚乙酸酯(Sigma)的形式按照计算比例
逐级混匀到次粉中。在基础饲料中, 以鱼粉、酪蛋白为主要蛋白源, 以鱼油、豆油为主要脂肪源, 饲料配
方及营养组成如表 1。固体原料均过 60 目筛, 所有原料充分混合均匀后, 通过机械挤压形成颗粒饲料(4
mm), 并在 60℃的烘箱中干燥至湿度为 10%, 用密封塑料袋保存在–20℃的冰柜中以供使用
[18]
。
表 1 实验基础饲料配方组成及营养组成 Tab. 1 Formulation and proximate composition of the
experimental diet
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