【目的】研究猪有腔卵泡发育和闭锁中颗粒细胞凋亡与卵泡液类固醇激素的变化,为了解猪有腔卵泡发育与闭锁的调控机理提供参考。【方法】从猪卵巢分离完整有腔卵泡,按质量分为健康卵泡、早期闭锁卵泡和晚期闭锁卵泡3类;再按卵泡直径大小分为大卵泡组(>5 mm)、中卵泡组(3～5mm)和小卵泡组(<3 mm)3组,制作完整有腔卵泡的石蜡切片,HE染色后观察其形态学变化。应用AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞仪检测壁层颗粒细胞凋亡情况,放射免疫测定法(RIA)分析卵泡液中雌二醇(E2 )和孕酮(P4 )浓度的变化
### 知识点总结
#### 一、研究背景与目的
- **背景**：卵泡发育与闭锁是哺乳动物生殖过程中的关键环节，对于理解物种繁殖能力具有重要意义。猪作为重要的农业动物之一，其卵泡发育的研究有助于提高繁殖效率。
- **目的**：探究猪有腔卵泡发育及闭锁过程中颗粒细胞凋亡与卵泡液中类固醇激素变化的关系，为深入理解卵泡发育与闭锁的调控机制提供科学依据。
#### 二、实验设计与方法
- **样本选取**：从猪卵巢中分离出完整的有腔卵泡，并根据卵泡的质量将其分为三类：健康卵泡、早期闭锁卵泡和晚期闭锁卵泡。进一步按照卵泡直径的大小分为三大组：大卵泡组（>5mm）、中卵泡组（3~5mm）和小卵泡组（<3mm）。
- **形态学观察**：通过制作石蜡切片并进行 HE 染色，观察不同类别卵泡的形态学特征。
- **颗粒细胞凋亡检测**：利用 Annexin V-FITC/PI 双染流式细胞仪技术，定量检测卵泡壁层颗粒细胞的凋亡情况。
- **激素水平测定**：采用放射免疫测定法 (RIA) 分析卵泡液中雌二醇 (E2) 和孕酮 (P4) 的浓度变化。
#### 三、主要发现
- **颗粒细胞凋亡**：健康卵泡中存在少量的凋亡颗粒细胞，而在卵泡闭锁过程中，颗粒细胞的凋亡率显著上升，尤其是小卵泡更为明显。晚期闭锁的小卵泡中，约有 60% 的颗粒细胞发生凋亡。
- **类固醇激素浓度变化**：
- 健康大卵泡组 E2 浓度显著高于中、小卵泡组，而 P4 浓度与中卵泡组无显著差异，但显著低于小卵泡组。
- 卵泡闭锁时，不论卵泡大小，E2 浓度均显著下降，而 P4 浓度显著升高。
- 在健康卵泡中，大卵泡的 P4/E2 比值小于 1，而中、小卵泡该比值小于 5；在早期闭锁卵泡中，大卵泡 P4/E2 比值大于 1，中、小卵泡则在 5~15 之间；当比值超过 15 时，卵泡进入晚期闭锁状态。
#### 四、结论与意义
- **结论**：颗粒细胞凋亡是导致卵泡闭锁的重要因素，且闭锁的程度与卵泡大小有关，小卵泡更易发生闭锁。
- **意义**：卵泡液中 P4/E2 比值可以作为评估卵泡质量的标准之一，这对于猪类生殖管理具有实际的应用价值。
- **展望**：未来的研究可以进一步探讨不同遗传背景下的猪只卵泡发育差异及其与颗粒细胞凋亡、类固醇激素变化之间的关系，以期提高猪只繁殖性能。
通过本研究，不仅加深了对猪有腔卵泡发育与闭锁机制的理解，也为优化猪只繁殖管理和提高生产效率提供了科学支持。
