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第
3
卷第
1
期
2004
年
1
月
杭州师范学院学报(自然科学版)
Journal
of
Hangzhou
Teachers
College(Natural
Science
Edition)
文章编号:
1008-
9403(2004)01-0073-04
扩增片段长度多态性技术
在动物遗传多样性研究中的应用
郝琦蕾,姜晋国
(1.杭州师范学院生命科学院,浙江杭州
310012:2.
山西师范大学生命科学院,山西临汾
041000)
Vo
l. 3
No.
1
]an.
2004
摘
要:扩增片段长度多态性
(AFLP)
是一种有效的分子遗传标记方法,具有快速、经济、简便、模板需要量
少、重复性高、结果可靠等优点.目前
AFLP
在动物方面的应用还不是很多.处于初级阶段.主要用于鉴定分类关
系、种群遗传多样性分析、遗传连锁图谱构建等方面.
关键词
AFLP;
分子遗传标记;动物学
中图分类号:
Q75
文献标
i
只码
:A
AFLP
技术
CAmplified
fragment length
poly-morphism).
是一种有效的
DNA
分子标记技术,由荷
兰科学家
Zabeau
等
1992
年创建的.它是
RFLP
技术和
PCR
技术相结合的产物,它克服了
RFLP
技术复
杂、
RAPD
稳定性差等缺点.具有两者之长,技术简易且结果稳定、可靠、
AFLP
多态性强、谱带丰富且清晰
可辨,是迄今为止最有效的分子标记之一.
1
AFLP
原理
基因组
DNA
经过限制性内切酶消化后,产生粘性末端,与人工合成的短的双链接头
C
arti ficial
adapter)
连接,互补连接后成为
DNA
模板,经过两步扩增而显示限制性片段长度的多态性.
2
AFLP
分析过程的步骤
2.1
DNA
酶切及人工接头的连接
用限制性内切酶对基因组
DNA
进行加工,获得所需扩增的
DNA
片
段,然后在
T4
连接酶作用下进行接头连接反应.
AFLP
分析成功的关键在于
DNA
的充分酶切和接头连
接的高效性.
2. 2
限制性片段的扩增
第一次扩增用含一个选择性碱基的引物进行预扩增反应,预扩增产物稀释后用
于第二次扩增反应,这次扩增反应的引物一般带有三个选择性碱基.两步扩增产生的指纹图谱更加清晰.
2.
3
扩增产物;疑胶电泳分析
CGel
analysis of the Amplified fragments)
:扩增产物通常在
4%~6%
的变
性聚丙烯酷肢凝胶上分离,可以用同位素。
_33P)ATP.
T4DNA
连接酶等进行末端标记,也可用银染法检
测产物.
3
影响
AFLP
实验的主要因素
收稿日期
:2003-10-jO
作者简介.郝琦蕾<1
968-)
.女、山西临汾人.杭州师范学院生命科学院硕士研究生.主要从事分子生物学方面的研究.
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