结核分枝杆菌H37Rv异柠檬酸裂解酶基因的克隆表达及活性 (2011年)

以结核分枝杆菌H37Rv基因为模板,PCR反应扩增该菌株的异柠檬酸裂解酶基因(ICL),将其克隆入原核表达载体pET28b中,并将pET28b-ICL转化入大肠杆菌BL21( DE3) 中进行诱导表达.结果表明,ICL蛋白的最佳诱导表达条件为:温度20℃,IPTG终浓度为0.25 mmol/L,诱导表达4h,在此条件下ICL实现了高效表达,以镍离子螯合型琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化ICL蛋白,纯化程度较高.酶学性质鉴定表明,实验获得了具有生物学活性的重组蛋白,重组ICL的比活力为24μmol/(mg. min