家蚕RanBP5L蛋白的克隆表达及功能分析
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石昌杰
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，吕正兵
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，陈剑清
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，聂作明
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，陈建
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，王丹
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，沈红丹
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，舒建洪
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，
全滟萍
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，张耀洲
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1 浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所，浙江杭州 (310018)
E-mail: shichangjie2006@163.com
摘要: RanBP5（Ran binding protein 5）是 RanBPs 家族（Ran binding proteins）中的重
要一员。 RanBPs 的作用在不同物种间相对保守，但是在植物和脊椎动物之间也存在明显的
不同之处。我们在本实验室构建的家蚕蛹 cDNA 文库中发现了 RanBP5 蛋白的类似物并原核表
达了该蛋白，将其命名为 RanBP5L。纯化的该重组蛋白经过质谱鉴定表达正确后免疫新西兰
大白兔得到抗血清，通过亚细胞免疫荧光定位发现该蛋白主要存在于细胞质中。荧光定量
PCR 对该蛋白在不同时期和组织的表达差异进行了初步研究，发现其主要存在蛹时期和精巢
中。
关键词: 家蚕；RanBPs；RanBP5L；原核表达；亚细胞定位；荧光定量 PCR
中图分类号:Q279
引 言
Ran结合蛋白RanBPs（Ran binding proteins）是一大类蛋白的统称，其中包括多种对细
胞周期调控起重要作用的细胞因子
[1, 2]
。RanBPs作用的发挥是通过结合Ran（Ras-related
nuclear small G-protein）来实现的。Ran是细胞核内的小分子蛋白，分子量约为25 kDa，20
世纪90年代被发现并证实具有GTP酶活性，Ran以与GTP或GDP结合的形式存在于细胞中，
活性的RanGTP依靠GTP水解活性水解成无活性的RanGDP，达到调节细胞生命活动的目的。
这种RanGTP到RanGDP的转换，起着分子开关的作用
[3]
。
现在多种RanBPs已经在酵母和哺乳类动物中得到鉴定，他们在调节Ran的功能方面的研
究也在如火如荼的进行中。这些RanBPs蛋白主要包括核孔蛋白、Karyopherins家族、GTPase
激活因子、RanBP1、RanBP2、RanBP3、RanBP5、鸟苷酸交换因子RCC1、NTF2、Mog1P、
Dis3 和RanBPM
[1, 2]
。研究发现RanBPs在氨基酸序列的中有高度的保守区域，这个保守区域
包括了与Ran结合的结构域和另外三个保守的序列，这三个序列是和Ran结合的必须序列而
且具有促进GTP水解的作用
[4]
。在不同的RanBPs蛋白之间C端和N端氨基酸的同源性非常的
低，这些不同点很有可能决定了Ran介入特定的生理学过程随后并在不同的组织中表现出不
同的功能
[5]
。
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本课题得到国家 973 计划课题No. 2005CB121006 和浙江省自然科学基金No. Y3080183 资助
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