非复制性腺病毒携带全长抗体AT2表达的研究

本研究主要探讨了非复制性腺病毒作为载体携带全长抗体AT2基因表达的研究，涉及到单克隆抗体的制备、重组腺病毒的构建、基因治疗的应用以及相关基因工程操作。以下是详细的知识点总结： 1. 单克隆抗体与杂交瘤技术：本研究首先回顾了单克隆抗体的发现历程，Kohler和Milstein通过细胞杂交技术成功制备了第一个能够分泌特异性抗体的B细胞杂交瘤细胞株，为单克隆抗体的研究和应用打下了基础。单克隆抗体的高特异性、均一性质使其在肿瘤治疗等领域具有广泛的应用前景。 2. 全长抗体及其在肿瘤治疗中的应用：全长抗体指的是由两个相同的轻链和两个相同的重链组成，具有完整的可变区和恒定区。AT2是一种抗表皮生长因子受体（EGFR）的单克隆抗体，主要用于肿瘤治疗。研究中提到的Cetuximab就是AT2抗体的一个实例，其对过量表达EGFR的肿瘤细胞有显著的治疗效果。 3. 基因治疗与重组腺病毒载体：基因治疗是指通过引入遗传物质（如全长抗体基因）到病人体内以达到治疗疾病的目的。腺病毒是一种常用的病毒载体，因其能够感染非分裂细胞且不整合入宿主基因组，成为基因治疗中常见的选择。重组腺病毒能够将全长抗体基因高效地传输到靶细胞内，并在细胞内表达出功能性的全长抗体。 4. 密码子偏爱性与表达量的提高：在真核生物体内，不同物种对于密码子的使用偏好存在差异，优化密码子可以提高异种表达的蛋白质的产量。本研究中，通过对靶向EGFR抗原的全长抗体AT2基因的部分氨基酸密码子进行修改，构建了重组腺病毒Ad5-NAT2，实验表明修改后的重组病毒能够提高全长抗体的表达量。 5. 实验方法：研究中详细介绍了构建重组腺病毒的过程，包括使用穿梭载体pDC339与5型腺病毒骨架质粒pBHGE3的重组，以及如何利用ELISA、Western和IFA技术来检测抗体的表达量、完整性和特异性结合能力。 6. 抗体表达特性的检测：通过ELISA法检测抗体的表达量，通过Western blot和IFA（免疫荧光分析）检测抗体的完整性和特异性。实验结果显示，腺病毒载体表达的抗体与商品化的AT2抗体性质相近，表达出的抗体是完整的，并且能够特异性结合EGFR阳性细胞表面的抗原。 7. 研究的潜在影响：本研究的目标是通过非复制性腺病毒载体表达全长抗体，从而降低传统抗体药物高成本的问题，这可能为普通患者提供更为经济的治疗方法。 通过上述知识点的总结，可以看出本研究不仅在技术上实现了利用重组腺病毒高效表达全长抗体的目标，而且在理论上为基因治疗提供了新的策略，特别是在抗体基因治疗领域具有重要的潜在应用价值。