第
34
卷
,
第
2
期
光 谱 学 与 光 谱 分 析
Vol.34
,
No.2
,
pp
340343
2014
年
2
月
S
p
ectrosco
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p
ectralAnal
y
sis Februar
y
,
2014
傅里叶变换红外光谱学显微成像技术在骨病研究中的应用和进展
尹建华
,
黄凤玲
,
钱志余
,
谢捷如
南京航空航天大学自动化学院生物医学工程系
,
江苏 南京
210016
摘
要
傅里叶变换红外光谱学显微成像系统的发展历程
、
系统构成
、
成像原理和模式选择
,
引出傅里叶变
换红外光谱学显微成像在生物医学领域开辟了骨病光谱 成像 这一 特定 研 究方 向
,
详 细论 述 了 该技 术 用 于研
究骨石化病
、
成骨不全症
、
骨质疏松症和骨软化症等骨病所取得的成果和进展
,
简单介绍了该技术的相关局
限性
,
并展望了其在生物医学研究领域的发展前景
。
关键词
傅里叶变换红外光谱
;
显微成像
;
高分辨
;
骨病
中图分类号
:
O657.3
;
Q3
文献标识码
:
A
犇犗犐
:
10.3964
/
j
.issn.10000593
(
2014
)
02034004
收稿 日期
:
20130424
,
修订 日期
:
20130628
基金 项目
:
国家自然科学基金项目
(
61275199
,
61378087
)
和南京航空航天大学引进人才科研启动基金项目
(
100356YAH13005
)
资助
作者 简介
:
尹建华
,
1974
年生
,
南京航空航天大学教授
email
:
y
in
@
nuaa.edu.cn
引
言
红外光谱用于生物物理学和生物化学进行结构分析已有
大半个世纪
。
该方法提供了重要 的结 构 信息
,
例 如组 织 的 组
成
,
蛋白质二级结构和相互作用
,
DNA
构象和结构 转变
,
脂
质构象的排 序 和 相 行 为 等
。
傅 里 叶 变 换 红 外
(
fouriertrans
forminfrared
,
FTIR
)
光谱技术则是在
20
世纪
80
年代后期兴
起
,
并在生物医学研究中发挥着 越 来 越重 要 的 作用
[
1
]
。
然 而
在传统应用中
,
红外 光谱
(
包 括
FTIR
)
需 要 待 测 的 样 品 必 须
匀质化
。
很大地 限 制 了 红 外 光 谱 在 生 物 组 织 研 究 方 面 的 应
用
。
因为生物组织当中的分子成分的空间分 布很 大程 度上 决
定了它们的功能
,
而样品的均匀 化显 然 破坏 了 这 些信 息
。
传
统制样方法 的 另 一 个 局 限 性 就 是 需 要 较 大 的 样 品 数 量
(
范
围
),
所测得的光谱是整个采样区域的平均光谱
。
红外光谱的这些局限性很早以前就已 被认 识
。
后来 有人
将显微镜和红外光谱仪进行耦合并用于微 量分 析
。
针对 非均
质材料的研究
,
这种 红 外 显 微 镜 采 用 逐 点 采 集 数 据 的 方 法
,
虽然耗时
,
但结合多元数据分析 等方 法
,
仍 然能 明 确 地分 辨
不同的组织类型和组织中的发病情形
。
相比 较于 标准 的组 织
病理学方法
,
具有更高的灵敏度
[
2
]
,
并 使人 们 不 必再 为 得 到
统计性生物医学结果而进行大量样品的研究
。
然而这种方法速度较慢
,
限 制了 此 技 术的 实 用 性
。
随 着
硬件
、
计算机
、
电子学和 化 学 计量 学 算 法的 发 展
,
成 像 设 备
的发展也取得了很大的进展
。
继传统的单元 探测 器对 样品 实
现点成像
(
Pointma
pp
in
g
)
之后
,
从电荷 耦合 元件
CCD
开始
,
二维探测器实现了具有空间分 辨的
(
紫 外
、
可 见
、
近 红外
)
光
谱信息采集
,
而非采用逐点 扫描 的 方 法
。
到
20
世 纪
90
年 代
中后期
,
中红外阵列探测器的商业开发克服 了传 统红 外显 微
镜的缺陷
,
促成
FTIR
成 像光 谱 仪 的开 发
;
1995
年
,
报 道 了
第一个焦平面阵列探测器
(
focal
p
lanearra
y
(
FPA
)
detectors
)
的相关成果
[
3
]
。
在 这 些 实 验 中
,
样 本 安 置 在 一 个 固 定 的 位
置
,
通过一个阵 列 探 测 器
(
通 常 由
64×64
个 单 元 探 测 器 组
成
)
收集空间信息
,
该 阵 列 探 测 器 可 以 在 单 位 时 间 内 收 集 大
量像素数据
。
然而
,
这些探测器最 初是 作 为军 事 用 途而 开 发
的
,
在光谱学应用 中 存 在 一 些 严 重 的 缺 点
,
比 如 成 像 复 杂
,
不易操作
,
且有较 高 的 噪 声 等
。
小 型 阵 列 探 测 器
(
16×1
)
的
出现引起成像技术的一次激动人心的变 化
。
2001
年
,
珀金 埃
尔默
(
PerkinElmer
)
公司推 出一 套 傅 里叶 变 换 红外 光 谱 成像
(
fouriertransforminfraredima
g
in
g
,
FTIRI
)
系 统
,
即 采 用 高
灵敏度的线性阵列探 测 器 并耦 合 一 个可 快 速 运动 的 样 品台
。
该仪器允许红外 光谱成像
(
Ma
p
s
或
Ima
g
es
)
以独立 的样品尺
寸采 集
,
和 基于
FPA
开 发的 红 外 光谱 成 像 仪器 在 数 据采 集
时间和操作方便性方面相比较具有更明显 的优 势
,
并降 低了
噪声和成本
。
在红外光谱学显微成像的过程中
,
所成 图像 当中 的每 一
个像素平面对应一个该位置区域的红外光 谱
,
通过 红外 光谱
的吸收
(
或透射
)
与波长 的变 化 关 系得 到 一 个平 均 吸 收率
(
或
透过率
),
该数值被对 应 于 一 定 的 颜 色 来 表 示 该 像 素 的 所 在
位置样品的形貌
。
所采集的红外光谱学图像 实际 上是 一个 四
维数据
,
蕴含着丰富的样品信息
,
不仅 实 现 了对 样 品 的形 貌
成像
,
同时可以获得样品的光谱和空间各位 置的 组成 和结 构
信息
,
使 得样 品 信 息的 表 达 更丰 富
、
形 象和 直 观
。
因 此
,
自
FTIRI
技术出现以来
,
虽然 仪器 系 统 较昂 贵
,
但 仍以 其 强 大