大肠杆菌碱性磷酸酶突变体的构建及其结构与功能研究 (2007年)

以大肠杆菌碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,AP)高活力突变株(L138PG233S)为亲本,采用重叠延伸PCR的方法进行定点突变,成功获得了氨基酸替换突变体3个,并对它们的酶活性、特性、内源荧光发射峰等与亲本酶进行了比较分析。结果发现:突变体酶的酶活降低了18%～85%,Km增加,Vmax值降低;与亲本酶相同,Zn2+、Mn2+、Mg2+是它们的激活剂,Na3PO4是它们的抑制剂;它们的内源荧光发射峰λmax也比亲本酶的大等。这些实验结果说明突变体酶活的降低直接与其构象变化有关,这些被