根据提供的文件内容,本文主要讲述的是一种用于检测猪细小病毒(Porcine Parvovirus, PPV)和猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus Type 2, PCV2)的二重液相芯片检测方法的建立。此技术是为了满足出入境检疫以及临床高通量检测的需求。以下是对该技术细节和相关知识点的详细说明:
1. 病毒介绍:
- 猪细小病毒(PPV)是一种常见的猪病原体,它能够引起猪繁殖障碍,严重影响畜牧业。
- 猪圆环病毒2型(PCV2)是猪圆环病毒病的主要病原,它导致猪免疫抑制,增加了猪群的易感性以及其它疾病的发病率。
2. 检测方法:
- 二重液相芯片技术(xMAP),即多重液相芯片技术,利用携带不同颜色编码的磁性微球来检测多个目标物质。
- 该技术通过特异性探针与目标病毒核酸序列的杂交来实现检测,每个探针都有不同的颜色编码,从而实现多目标的快速检测。
3. 检测过程:
- 根据GenBank中的PPV结构蛋白vP2基因以及PCV2全基因序列设计特异性探针、引物和探针互补序列。
- 将这些探针与磁性微球偶联,并对下游引物及探针互补序列进行生物素标记。
- 通过不对称性二重PCR扩增靶序列,将PCR产物与偶联好的探针进行杂交。
- 最后利用液相芯片仪对杂交结果进行检测分析。
4. 技术优化和效果:
- 对检测条件进行优化,确保二重液相芯片检测技术的特异性和灵敏度。
- 该方法对PPV的基因拷贝数检测下限为1.53×10,对PCV2的基因拷贝数检测下限为2.58×10。
- 对56份临床样品进行检测,与单项PCR检测结果符合率为100%,显示了高度的准确性和重复性。
5. 应用前景:
- 建立的PPV和PCV2二重液相芯片检测方法可广泛应用于出入境检疫和兽医临床检验。
- 该技术将有助于快速监测和控制猪病疫情,减少经济损失,提高兽医临检效率。
6. 文献信息:
- 该研究发表在《畜牧兽医学报》2012年第43卷第10期,页码1603-1608。
- 文章作者为王晶钰、朱向博、刘业兵、韩雪清、王慧煜、张丽、张磊、张晓杰、唐攀等,分别来自于西北农林科技大学、中国兽医药品监察所和中国检验检疫科学研究院。
- 文章提到基金项目支持,包括国家自然科学基金项目(编号***和***)以及十一五国家科技支撑计划项目(编号2007BAD86B04)。
7. 关键词:
- 猪细小病毒(PPV)
- 猪圆环病毒2型(PCV2)
- 二重液相芯片(xMAP)
- 检测
以上即是对给定文件内容的知识点详细说明,其中包含了研究的目的、方法、过程、结果和应用等各个层面的详细信息。