瑞典突变型人淀粉样前体蛋白(APP_(SWE))基因的构建与鉴定.pdf

瑞典突变型人淀粉样前体蛋白(APP_(SWE))基因的构建与鉴定 本文的主要内容是关于瑞典突变型人淀粉样前体蛋白(APP_(SWE))基因的构建与鉴定。该基因是阿尔茨海默氏病(AD)的重要致病因子，研究其构建与鉴定对于AD的发病机理和治疗药物的筛选奠定基础。 该研究的目的是构建携带瑞典突变型淀粉样前体蛋白基因(APP_(SWE))的表达载体pIRES2-EGFP-APP_(SWE)。方法是提取脑血管组织总RNA，反转录为cDNA；以cDNA为模板，NCBI上查找APP的序列，设计引物，应用PCR和Overlap PCR技术扩张野生型APP695，点突变技术诱导构建突变型APP_(SWE)，测序证实，并进行质粒转染细胞验证。 研究结果表明，该方法可以成功构建瑞典突变型APP_(SWE)，转染后的细胞可见荧光蛋白，并表达APP蛋白。该研究结果为后续研究AD的发病机理和治疗药物的筛选奠定基础。 该研究的关键技术点有： 1. RNA的提取及cDNA的制备：使用Trizol试剂盒提取总RNA，并反转录为cDNA。 2. PCR和Overlap PCR技术：使用PCR和Overlap PCR技术扩张野生型APP695，并点突变技术诱导构建突变型APP_(SWE)。 3. 测序证实：使用DNA测序技术证实构建的突变型APP_(SWE)。 4. 质粒转染细胞验证：使用质粒转染细胞验证构建的突变型APP_(SWE)的表达。 该研究的结论是，以脑血管组织为材料，应用RT-PCR和点突变技术可以成功构建瑞典突变型APP_(SWE)，这为后续研究AD的发病机理和治疗药物的筛选奠定基础。 该研究的创新点在于： 1. 首次使用脑血管组织为材料，构建瑞典突变型APP_(SWE)。 2. 应用RT-PCR和点突变技术构建瑞典突变型APP_(SWE)。 3. 使用质粒转染细胞验证构建的突变型APP_(SWE)的表达。 该研究的意义在于： 1. 该研究为AD的发病机理和治疗药物的筛选奠定基础。 2. 该研究提供了一种新的方法来构建瑞典突变型APP_(SWE)。 3. 该研究为后续研究AD的发病机理和治疗药物的筛选奠定基础。