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第二章10基因工程基因文库的构建.pptx

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第二章10基因工程基因文库的构建.pptx

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第六部分基因文库的构建

一、基因文库的概述

二、基因组DNA文库的构建

三、cDNA文库的构建

1、基因文库(gene library)概念

 是指将某种生物的全部基因组的遗传信息贮存

在可以长期保存的稳定的重组体中，以备需要

时能够随时应用它分离所需要的目的基因，这

种保存基因遗传信息的材料，就称为基因文库

又称DNA文库。

 基因文库由外源DNA片段、载体和宿主细胞组

成。

一、基因文库的概述

2、基因文库的分类

 基因组DNA：提取的染色体基因组DNA。如果要研究

的是控制基因表达的调控序列，或是在mRNA中不存

在的某种特定序列，有关这类的信息就只能从染色

体基因组DNA中获得。

 cDNA：mRNA反转录成的cDNA 。如果研究的目标是

弄清一种蛋白质的氨基酸顺序，可以根据克隆的

cDNA分子的核苷酸序列直接推导出来。

 基因组文库（genomic library）含有全部基因。

 cDNA文库（cDNA library）含有全部蛋白质编码的

结构基因。

 用鸟枪法构建基因组文库，材料来自染色体DNA。

 用cDNA法构建cDNA文库，材料来自mRNA。

 在高度分化的生物体中，不同组织和细胞在不同时段

的mRNA种类不同（即基因的表达谱不同），因此同

种生物体的cDNA文库一般还有组织细胞的界定，如肝

组织cDNA文库或胚胎组织cDNA文库等。很显然，

cDNA文库的信息量远小于基因组文库。

(1)基因组文库(Genomic library)

 是指将某种生物体的全部基因组DNA用限制性内切

酶或机械力量切割成一定长度范围的DNA片段，再

与合适的载体在体外重组并转化相应的宿主细胞

获得的所有阳性菌落，这个群体就称为该生物基

因组文库。

 目的是分离有用的目的基因和保存某种生物的全

部基因。

 基因组文库根据DNA来源分为：核基因组文库、叶

绿体基因组文库、线粒体基因组文库。

 克隆外源 DNA片段的切割主要采用机械断裂或限

制性部分酶解两种方法，其基本原则：

 ①DNA 片段之间存在部分重叠序列。

 ②DNA 片段大小均一。

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