imageJ软件分析双标及多标格免疫荧光共表达操作步骤1.pdf

ImageJ软件分析双标及多标格免疫荧光共表达操作步骤 ImageJ是一个功能强大的图像处理软件，对于生物医学研究领域中的图像分析非常重要。下面是使用ImageJ软件进行双标及多标格免疫荧光共表达操作步骤的详细介绍： 1. 下载和安装ImageJ软件 需要从ImageJ官方网站下载该软件，并安装到计算机中。同时，也需要下载一些重要的插件，如colocalization-finder插件等，这些插件存在于安装目录下，否则，一些功能无法找到。 2. 打开图片文件 将要分析的图片文件打开，出现如下画面时，将一些勾勾去掉，这样的话，一张含有多通道的免疫荧光源图片只以一张图片出现，而不会出现每一种荧光分别就会有一张图片，这对后面选取目的区域是非常有利和方便的。 3. 图片转换 需要将图片转换为TIFF格式，否则好像不能用于分析。 4. 图片处理 打开图片后，将图片转换为8-或者16-bit，以便于分析和观看。在image根目录里选择rotate旋转图片，图中可以把图片逆向旋转了90度。 5. 选定区域复制 将选定的区域复制到一个新的文档中。步骤：edit,copy-dile,new,internal clipboard。即得到一张某一激发波长下的蛋白免疫荧光图，默认显示为clipboard。 6. 多通道荧光图像处理 将鼠标放在原图片上，并且轻轻转动滑轮，原图片画面即显示第二个激发波长下的图片，见左上角有C:2/3，即表示是3中荧光通道中的第二个荧光通道图片，同样将选定的区域复制到一个新的文档中。步骤：edit,copy-dile,new,internal clipboard。即得到第二张某一激发波长下的蛋白免疫荧光图，默认显示为clipboard-1。 7. 统计分析 现在已经将不同通道下，目的蛋白的荧光图片都选择和建立好了，分别有三张图片，代表2种蛋白，三种激发波长。下面分别进行2种蛋白共存的分析过程。 8. 共存分析 点plugin,colocalization finder，出现后图画面。将要统计的2张选好区域的目的图片，如clipboard-1和clipboard-2显示在桌面上，并在分析对话框中分别选上，点OK。 9. 结果分析 结果出来了，分别是共存相关系数图表和共存的模拟效果图，同时还有一个相关性的散点分布图scatterplot。 10. 结果保存 新开一个excel文档，将结果拷贝并复制。将相关性的散点分布图scatterplot以TIFF/JPEG形式保存，建议最好附在共存图片或者文档中，以让图片说话，比起你用文字说话有证据多了。 11. 重复分析 重复步骤10以后的步骤，按照同样的方法分别统计分析clipboard和clipboard-1以及clipboard和clipboard-2的共存效果。 通过ImageJ软件，可以对双标及多标格免疫荧光共表达进行详细的分析和处理，为生物医学研究提供了强大的工具支持。