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细菌质粒的发现 ,解决了上述三大问题 。
1.2.1 限制性核酸内切酶
限制性内切酶不切割自身 DNA 是因为原核生物中不存在酶的识别序列或
识别序列已经被修饰 。
1.2.2 DNA 连接酶
作用实质 :将具有末端碱基互补的 2 个 DNA 片段连接在一起 ,形成重
组 DNA 分子,其起作用时不需要模板 。
1.2.3 基因工程的载体 -质粒
基因载体的作用是运载目的基因进入宿主细胞 ,使之能得到复制和进
行表达 。也就是说 ,离开染色体的外源 DNA 不能复制 ,而而插入复制子
DNA 的外源 DNA 可作为复制子的一部分在受体菌中进行复制 ,这种复制
子 是外源基因的载体 。此外 ,为满足其使命 ,还必须具备如下一些特性 :
①能在宿主细胞内进行独立和稳定的 DNA 自我复制 ,在其 DNA 插入外源
基因后 ,仍然保持稳定的复制状态和遗传特性 。②易于从宿主细胞中分离 ,
并进行纯化 。③ 载体 DNA 序列中有适当的限制性内切酶位点 ,并位于
DNA 复制的非必需区内 ,可以在这些位点上插入外源 DNA,但不影响载体
自身 DNA 的复制 。某些病毒载体在外源 DNA 插入后变成缺损性病毒株 ,
只能在有辅助存在时才能进行正常增殖 。④具有能够观察的表型特征 〔有
报告基因 〕,在插入外源 DNA 后,这些特征可以作为重组 DNA 选择标志 。
1.3 基因工程的基本过程
1.4 基因工程的应用
2 目的基因的获取