磁分离酶联免疫技术检测FSH、LH和hCG(一).pdf

磁分离酶联免疫技术是一种高灵敏度和高特异性的非放射性免疫检测方法，尤其适用于FSH（促卵泡激素）、LH（黄体生成素）和hCG（人类绒毛膜促性腺激素）等生物标志物的检测。这种方法在80年代中期由瑞士Serono诊断中心开发，称为磁性抗体免疫技术（MAIA）。它利用了磁性微粒与标记抗体的结合特性，实现了游离标记抗体和标记抗原-抗体复合物的有效分离。 实验原理基于双抗体夹心法，FSH、LH和hCG分别与碱性磷酸酶（ALP）和异硫氰酸荧光素（FITC）标记的单克隆抗体结合，形成酶标抗体-抗原复合物。接着，加入含有与FITC结合的磁性微粒的磁分离剂，这些微粒会与复合物结合，在永久磁体的吸引下，复合物沉淀至管底，从而实现游离标记抗体与复合物的分离。然后，通过加入底物单磷酸酚酞（PMP），ALP催化PMP水解产生酚酞，酚酞在特定pH环境下呈现桃红色。再次使用磁性分离器沉淀复合物，上清液通过SEROZYME-I型酶联免疫内分泌定量测定仪进行测量。 在实验中，使用了SEROZYME-I型酶联免疫内分泌定量测定仪，该仪器具备三波长（492nm、550nm、630nm）同时检测功能，可进行程序编辑、曲线绘制、微机控制和打印输出。此外，还需要磁性分离器和混匀器。试剂盒包含了FITC和牛ALP标记的鼠抗人hCG、FSH和LH单克隆抗体，以及一系列标准液、磁分离试剂、清洗浓缩液、基质液、稀释缓冲液和终止液。 检测过程分为四个步骤：抗原抗体反应、磁性分离、显色反应和读出结果。抗原抗体反应阶段，将待测血清与反应试剂混合并在37℃水浴中保温；磁性分离阶段，加入磁分离试剂使复合物沉淀；显色反应阶段，加入基质单磷酸酚酞，使结合在复合物上的酶催化的颜色反应；通过SEROZYME-I型仪器直接读取结果。 实验结果显示，hCG、FSH和LH的标准曲线在一定浓度范围内（hCG: 0-500mIU/mL，FSH: 0-150mIU/mL，LH: 0-200mIU/mL）与吸光度呈线性关系，这表明该方法在这些浓度范围内具有良好的线性响应和精确度。 磁分离酶联免疫技术为FSH、LH和hCG的检测提供了高效、准确的手段，适用于临床诊断和研究，特别是对于生殖健康和早期妊娠检测等领域。