关于三种荧光标记的短双链RNA体外转染特性的比较.pdf
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2023-08-12
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关于三种荧光标记的短双链 RNA 体外
转染特性的比较
【摘要】 目的：比较三种不同荧光标记的短双链 RNA(siRNA)体外转染特
性. 方法：利用脂质体 LipofectamieTM2000 转染三种荧光标记 siRNA 入小鼠胚胎
成纤维细胞系 NIH 3T3，流式细胞仪观察转染效率，普通倒置荧光显微镜观察其淬
灭情况，激光共聚焦显微镜观察其在细胞内的分布情况. 结果：相同转染条件下三
种荧光 siRNA 进入细胞的速度，细胞内的定位不同，转染效率不同，三种荧光标记
的抗淬灭能力也不同. 结论：荧光标记 siRNA 可以起到良好的示踪作用. 用荧光标
记 siRNA 作为无荧光 siRNA 的分布和转染效率参照时，要考虑到所选用荧光标记
siRNA 与无荧光标记 siRNA 的差异.
【关键词】 荧光标记；siRNA；转染
【Abstract】 AIM: To compare the transfection character of three
different fluorescently labeled small interfering RNA (siRNA) in vitro.
METHODS: Three fluorescently labeled siRNA were transfected with
LipofectamieTM2000 into NIH 3T3 cells for moni toring their
transfection efficiency with flow cytometry， tracking their delivery
with confocal microscopy and checking their photostability with
fluorescent microscope. RESULTS: These three fluorescently labeled siRNA
varied in intracellular distribution， transfection efficiency and
quench speed. CONCLUSION: The fluorescence labeled siRNA helps to
tracking the delivery of siRNA in cells. The difference between
fluorescently labeled siRNA and unlabeled siRNA should be considered
when the fluorescently labeled siRNA is used to study the distribution
and transfection efficiency of siRNA.
【Keywords】 fluorescence label；small interfering RNA；transfection
0 引言
化学合成的 siRNA 可以高效特异地抑制靶基因的表达，不仅是分析基因功能的
有力工具且有望成为新型药物［1］，但递送效率低和体内有效性问题仍然是其应
用的瓶颈，因此，深入研究其在体内的分布和动力学过程已逐步受到重视［2］.
利用荧光显微镜、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜等方法检测荧光标记siRNA［
3］，观察其摄取、分布及代谢情况，借以推断无荧光标记siRNA 的转染效率和分
布. 然而目前虽有多种商品化无沉默效应的荧光标记 siRNA 可供选择，但它们的分
布和转染效率是否一致尚少见报道. 本研究比较三种常用荧光标记 siRNA 利用脂质
体转染时转染效率、荧光淬灭情况和细胞内分布特点，以探讨应用荧光标记siRNA
时需注意的问题.
1 材料和方法
1.1 材料
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