Pierce Crosslink IP Kit.pdf

Pierce Crosslink IP Kit是Thermo Scientific推出的一款用于免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）实验的工具包，特别适用于通过共价交联抗体到Protein A/G树脂上来高效捕获抗原。该套件结合了DSS（双琥珀酰亚胺亚磺酸盐）的稳定交叉链接化学和Pierce Protein A/G Plus Agarose的高亲和吸附能力，为执行IP提供了卓越的方法。 1. **核心组件：** - **Pierce Protein A/G Plus Agarose**：这是一种经过改良的琼脂糖凝胶，含有Protein A和G，可以结合多种类型的抗体，具有高亲和力和大吸附容量，适合各种抗原的捕获。 - **DSS (disuccinimidyl suberate)**：无水格式，用于在抗体与树脂之间形成稳定的共价交联，确保抗体在免疫沉淀过程中的稳定性。 - **IP Lysis/Wash Buffer**：用于细胞裂解和洗涤步骤，其成分包括Tris、NaCl、EDTA、NP-40和甘油，能有效溶解细胞并保持抗原的完整性。 - **100X Conditioning Buffer**：中性pH缓冲液，用于调节和准备树脂。 - **20X Tris-Buffered Saline (TBS)**：稀释后成为Tris盐溶液，用于洗涤和漂洗步骤。 - **Elution Buffer**：pH 2.8，包含主要胺，用于温和地从树脂上释放捕获的抗原。 - **Pierce Spin Columns – Screw Cap**：带有配件的离心柱，方便抗体-抗原复合物的分离和收集。 - **Control Agarose Resin**：交联4%珠状琼脂糖树脂，作为对照，评估实验效果。 2. **操作流程：** - **预处理**：试剂收到后，需在4°C储存。DSS需要在干燥条件下存于4°C。 - **抗体偶联**：将抗体与20X Coupling Buffer混合，然后与Protein A/G Plus Agarose共孵育，通过DSS进行交联。 - **样品裂解**：细胞用IP Lysis/Wash Buffer裂解，释放抗原。 - **免疫沉淀**：将抗体交联的树脂加入裂解液中，使抗原与抗体结合。 - **洗涤**：用TBS清洗去除非特异性结合的蛋白。 - **解离**：用Elution Buffer温和地解离抗体-抗原复合物。 - **样本分析**：收集的抗原可通过SDS-PAGE或其他检测方法进行分析。 3. **优化的缓冲液系统**： 套件提供的缓冲液经过优化，旨在提高抗原回收率和实验的重现性，确保IP实验的成功率。 4. **配套耗材**： 除了核心试剂，套件还提供了一系列微离心管和离心柱，便于实验操作，减少样品损失。 Pierce Crosslink IP Kit为研究人员提供了一个全面的解决方案，用于研究蛋白质-蛋白质相互作用、磷酸化位点鉴定等生物学过程，简化了免疫沉淀实验的复杂性，提高了实验效率和结果的可靠性。