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染色体步移技术(Genome Walking)是一种重要的分子生物学研究技术,使用
这种技术可以有效获取与已知序列相邻的未知序列。染色体步移技术主要有以
下几方面的应用:
1. 根据已知的基因或分子标记连续步移,获取人、动物和植物的重要调控基
因,可以用于研究结构基因的表达调控。如分离克隆启动子并对其功能进行研
究;
2. 步查获取新物种中基因的非保守区域,从而获得完整的基因序列;
3. 鉴定 T-DNA 或转座子的插入位点,鉴定基因枪转基因法等转基因技术所导
致的外源基因的插入位点等;
4. 用于染色体测序工作中的空隙填补,获得完整的基因组序列;
5. 用于人工染色体 PAC、YAC 和 BAC 的片段搭接。
其主要原理是根据
已知 DNA 序列,分别设计三条同向且退火温度较高的特异性引物
(SP Primer),与退火温度较低的兼并引物,进行热不对称 PCR 反应。
现在有很多 Genome Walking Kit,相应的说明书都介绍的很详尽,下面给你发
一个原理图:
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