【知识点详解】
1. 基因工程概念:基因工程是指在分子生物学水平上,将一个生物体的基因(目的基因)转移到另一个生物体的基因组中,从而改变该生物体的遗传特性。例如,将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆菌,使大肠杆菌能够生产人干扰素。
2. 基因工程操作过程中的工具和步骤:在基因工程的操作中,需要使用DNA连接酶来连接切割后的DNA片段,同一种限制酶用于切割质粒和目的基因,以获得相同的黏性末端,具有标记基因的质粒用于筛选转化成功的宿主细胞,而不需RNA聚合酶(用于转录RNA)和脱氧核苷酸(用于DNA复制)。
3. 基因表达载体构建:一个完整的基因表达载体通常包括目的基因、启动子(启动转录)、终止子(终止转录)、标记基因等,不同的载体可能有差异,不只限于这些基本组件。
4. 外源基因表达:在大肠杆菌中表达β珠蛋白基因时,通常会使用具有抗性基因的质粒作为载体,如四环素抗性基因,这样可以通过抗性筛选出成功导入目的基因的菌株。但不能直接从成熟红细胞中提取DNA,因为它们没有细胞核;重组质粒的构建需要用限制酶和DNA连接酶处理;CaCl2处理大肠杆菌能增加其细胞壁通透性,便于重组质粒导入。
5. 蛋白质工程:蛋白质工程不是直接操作蛋白质分子,而是设计并修改基因序列,从而产生新的蛋白质。它能产生自然界中不存在的蛋白质。
6. 基因工程应用:基因治疗是将正常基因导入病人体内,替代缺陷基因,而不是直接诱变;基因诊断基于DNA分子杂交技术;基因探针通常针对特定病毒,无法检测所有病毒;生产乙肝疫苗时,目的基因可能来自病毒DNA。
7. 基因工程与蛋白质工程区别:两者都是分子水平操作,基因工程主要涉及基因,而蛋白质工程是对基因进行改造以获得特定蛋白质。
8. 细胞全能性:高度分化的植物细胞在适当的条件下仍然可以表现出全能性,即形成完整植株。细胞内的全部基因是全能性的基础,但动物细胞培养虽然能大量增殖,但一般不表现全能性,只能形成细胞系,不形成完整个体。
9. 植物体细胞杂交:体细胞杂交技术目的是获得杂种植株,可以克服远缘杂交不亲和的问题。涉及去除细胞壁形成原生质体,诱导融合,形成杂种细胞,然后再生植物体。
10. 细胞脱分化:已分化的细胞在特定条件下(如植物组织培养)失去分化状态,转变为具有分生能力的细胞,形成愈伤组织,这个过程称为脱分化,需要激素如生长素和细胞分裂素的诱导。
11. 植物组织培养:图示过程展示了植物组织培养的典型步骤,从A到F表达了细胞的全能性,C代表愈伤组织,由高度液泡化的薄壁细胞组成,最终可以发育成完整的植株(F)。