没有合适的资源?快使用搜索试试~ 我知道了~
实时荧光定量PCR简介及其在食品监测领域中的应用要点.pdf
1.该资源内容由用户上传,如若侵权请联系客服进行举报
2.虚拟产品一经售出概不退款(资源遇到问题,请及时私信上传者)
2.虚拟产品一经售出概不退款(资源遇到问题,请及时私信上传者)
版权申诉
0 下载量 149 浏览量
2023-11-05
22:19:23
上传
评论
收藏 2.13MB PDF 举报
温馨提示
试读
15页
实时荧光定量PCR简介及其在食品监测领域中的应用要点.pdf
资源推荐
资源详情
资源评论
实时荧光定量 PCR 简介及其在食品检测领域中应用
摘要:实时荧光定量
PCR
是在定性
PCR
技术基础上发展起来的核酸定量技术;该技术不仅实 现对
DNA
模板定
量,且具有灵敏度高、特异性强、无污染性、及实时性和准确性等特点。该 文主要介绍实时荧光定量
PCR
原理和
在食品检测中应用,及其在食品领域发展前景。
关键字: 荧光定量
PCR
;致病菌检测;转基因食品检测
Abstract:
Real
—
me fluoroge nic qua ntitative polymerase Chain React ion is a qua ntitative nu cleic acids tech
no logy based on qua nlity PCR
,
with characteristics of high sen sitivity and specificity
,
pollution
-
ree
,
instantaneity and accuracy as well as realization for quantitation of DNA template. its principle and application
in food detection have been introduced in this article
,
and its prospect in food field predicted.
Key word :
real
-
ime qua ntitative PCR
;
pathoge n detect ion
;
gen etically modified food detect ion
、实时荧光定量
PCR
技术原理
实时定量荧光
PCR
技术是从传统
PCR
技术发展而来,其基本原理是相同的, 主要不同
之处是其定量的体系。
PCR
反应过程产生
DNA
拷贝数,随反应循环数增 加,以呈指数方式增
加逐渐转入平台期。在传统
PCR
中,用终点法对
PCR
产物定 量有不足之处;而在实时荧光定
量
PCR
反应中,引入了一种荧光化学物质,加入的 荧光物质具有特定的波长,随着
PCR
反应
的进行,
PCR
反应产物不断累计,荧光 信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个
荧光强度信号,这样我们就可 以通过荧光强度变化监测产物量的变化, 从而得到一条荧光扩
增曲线图。一般而言, 荧光扩增曲线扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段,荧光
信号指数扩增 阶段和平台期。在荧光背景信号阶段,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩
盖,我 们无法判断产物量的变化。而在平台期,扩增产物已不再呈指数级的增加。
PCR
的
终产物量与起始模板量之间没有线性关系, 所以根据最终的
PCR
产物量不能计算出 起始
DNA
拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段,
PCR
产物量的对数值与起始模 板量之间存在线
性关系,我们可以选择在这个阶段进行定量分析。
为了定量和比较的方便,在实时荧光定量
PCR
技术中引入了两个非常重要的
概念:荧光阈值和
CT
(
threshold value
)值。荧光阈值是在荧光扩增曲线上人为设 定的一个
值,它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上,但一般我们将荧光 域值的缺省设置是
3-15
个循环的荧光信号的标准偏差的
10
倍。每个反应管内的荧 光信号到达设定的域值时所
经历的循环数被称为
CT
值。
CT
值与起始模板的关系研 究表明,每个模板的
CT
值与该模板
的起始拷贝数的对数存在线性关系,起始拷贝 数越多,
CT
值越小。利用已知起始拷贝数的标
准品可作出标准曲线,其中横坐标 代表起始拷贝数的对数,纵坐标代表
Ct
值。因此,只要获
得未知样品的
Ct
值,即 可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。
[1
~
2]
二、实时荧光定量
PCR
类型
实时荧光定量
PCR
类型主要有探针类和非探针类两种。探针类是利用与靶序列 特异杂交
探针指示扩增产物增加,特异性高;而非探针类是即实时定量荧光
PCR
技
术最后是通过标准曲线对未知模版进行定量分析的方法。利用染料或特殊设计引物 指示扩增
增加,特异性受到质疑,但其简便易行。近年来,又发展一些新的预防或 识别非特异扩增的
探针法,例如
Amplise nsor
技术、分子信标(
Molecular beacon
)、
Lightcycler
技术、复合
探针法(
Complex probeS
等。
(
1
实时荧光定量
PCR
类型探针类
按其基团标记和能量转移的方式,目前已经开发出几种相关的技术,大体可以
分为水解探针和杂交探针两类。
TaqMan TM
探针
(
水解探针
)
、
TaqMan MGB (
水解探
针
)
、
Dual-oligo FRET pairs(
双杂交探针
)
、
MolecularBeacons (
杂交探针
)
、
ScorpionsTM/AmplifluorTM (
杂交探针
)
、
Universal probe library-LNA ( locked nucleic
acids
水解探针
)
、
LUX (
杂交探针
)
、
Simple probe
探针等
[3]
,具体见图
1
。
A.DNA
结合染料
B.
杂交探针
C.
水解探针
D.
分子信标
E.
蝎状引物
F.
发卡式引物
G. lightupon extention
杂交探针
图
1.
各种探针工作原理
1
)水解探针一
TaqMan
TM
及
TaqMan
系列探针
TaqMan™
探针的长度为
20~24 bp,
在其
5
末端标记一个荧光报告基团,
3
末端 标记一
个荧光淬灭基团,其序列与两引物包含序列内的一段
DNA
模板完全互补。探 针完整时,报告
基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收。较之常规探针,
TaqMa n
探
1■+ Sunrlw
SA>- tcplui tluHuplta
耘
• I I H-l ia fll-r M I /
( A |M *h -nKrisf
9
• pub nwri* Hi
S
A
F
©* I viirMifif Hanmcapi
I). MOtrruihr
I
K
*
中
IH
• 0 Hwnphdnr
剩余14页未读,继续阅读
资源评论
a66889999
- 粉丝: 39
- 资源: 1万+
下载权益
C知道特权
VIP文章
课程特权
开通VIP
上传资源 快速赚钱
- 我的内容管理 展开
- 我的资源 快来上传第一个资源
- 我的收益 登录查看自己的收益
- 我的积分 登录查看自己的积分
- 我的C币 登录后查看C币余额
- 我的收藏
- 我的下载
- 下载帮助
安全验证
文档复制为VIP权益,开通VIP直接复制
信息提交成功