技术及其应用
引物 是PCR特异性反应的关键，取决于引物与模板DNA互补的程度。
引物 是PCR特异性反应的关键，取决于引物与模板DNA互补的程度。
制备目的基因和相关载体；
将mRNA逆转录合成cDNA ，再与载体连接成重组DNA，将其引入宿主细胞并进行扩增，所得分子克隆的混合体称为cDNA文库。
针对载体携带有某些标志基因如抗药性标志基因(ampr、tetr 、kanr等)和目的基因而设计的筛选方法。
为携带目的基因，实现其无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子，称为载体。
是指利用DNA复性原理，把不同来源的DNA单链或DNA与RNA混合，如单链分子间有碱基配对关系，则可形成杂化双链的过程。
制备基因组DNA文库 (genomic library)
Northern印迹杂交
(三)将外源DNA导入宿主细胞
能催化单核苷酸转移到DNA的3/-端羟基上。
不同的限制性内切酶识别和切割的特异性不同，结果
有3种不同的情况：
①
①
产
产
生
生
3′
3′
突
突
出
出
粘
粘
性
性
末
末
端
端
：
：
以
以
Eco
Eco
RⅠ
RⅠ
为
为
例
例
：
：
5′•••G↓
5′•••G↓
AATTC•••3′
AATTC•••3′
5′•••G
5′•••G
AATTC•••3′
AATTC•••3′
3′•••CTTAA↑
3′•••CTTAA↑
G•••5′
G•••5′
3′•••CTTAA
3′•••CTTAA
G•••5′
G•••5′
②
②
产
产
生
生
5′
5′
突
突
出
出
粘
粘
性
性
末
末
端
端
：
：
以
以
Pst
Pst
Ⅰ
Ⅰ
为
为
例
例
：
：
5′•••CTGCA
5′•••CTGCA
↓
↓
G•••3′
G•••3′
5′•••CTGCA
5′•••CTGCA
G•••3′
G•••3′
3′•••G
3′•••G
↑
↑
ACGTC•••5′
ACGTC•••5′
3′ •••G
3′ •••G
ACGTC•••5′
ACGTC•••5′
③
③
产
产
生
生
平
平
末
末
端
端
：
：
Nru
Nru
Ⅰ
Ⅰ
为
为
例
例
：
：
5′•••TCG↓
5′•••TCG↓
CGA•••3′
CGA•••3′
5′•••TCG
5′•••TCG
CGA•••3′
CGA•••3′
3′•••AGC↑
3′•••AGC↑
GCT•••5′
GCT•••5′
3′•••AGC
3′•••AGC
GCT•••5′
GCT•••5′
(4)
(4)
切
切
割
割
位
位
点
点
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