三氟乙酸在HPLC中的应用.docx
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2023-07-30
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在 HPLC 中的应用
降低三氟乙酸用量，改善质谱分析
在反相色谱分离多肽和蛋白质的实验中，使用三氟乙酸
(TFA) 作为离子对试剂是常见的手段。流动相中的三氟乙酸通过
与疏水键合相和残留的极性表面以多种模式相互作用，来改善峰
形、克服峰展宽和拖尾问题。三氟乙酸与多肽上的正电荷及极性
基团相结合以减少极性保留，并把多肽带回到疏水的反相表面。
以同样的方式，三氟乙酸屏蔽了固定相上残留的极性表面。三氟
乙酸的行为可以理解为它滞留在反相固定相的表面，同时与多肽
及柱床作用，这已在 Vydac Advances for Spring, 1997 中得
到了报导 。
三氟乙酸优于其他离子修饰剂的原因是它容易挥发，可以方
便地从制备样品中除去。另一方面，三氟乙酸的紫外最大吸收峰
低于 200nm ，对多肽在低波长处的检测干扰很小。
改变三氟乙酸的浓度，可以细微地调整多肽在反相色谱上的
选择性。这一影响对于优化分离条件、增大复杂色谱分析（如多
肽的指纹图谱）的信息量是非常有益的。
三氟乙酸添加在流动相中的浓度一般为 0.1% ，在这个浓度下，
大部分的反相色谱柱都可以产生良好的峰形，当三氟乙酸浓度大
大低于这个水平时，峰的展宽和拖尾就变得十分明显。
LC/MS 液质联用
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