链特异性RT-qPCR标准曲线制备
需积分: 5 129 浏览量
2022-05-31
12:22:06
上传
评论
收藏 721KB DOCX 举报
qPCR 标准曲线制
实验注意事项
1. 试剂耗材准备: qPCR 的操作简单但是要严谨!建议小伙伴们提前备好耗材和
试剂!耗材保证无酶无菌，个人建议尽量选择进口枪头，减少液体挂壁，更
为准确。(使用过很多厂家的八连管,进口的不管是做工还是结果上， 本人都觉得更好，
也欢迎小伙伴们好货推荐! )镊子提前高压，加样所用金属托架提前放置冰箱降
温。
2. RNA 提取和反转录:低温操作! Trizol 提取时注意蛋白质层的分离! Mix 配置后
切忌不可反复冻融!注意空气中片段核酸污染! RNA 提取后不可久放尽快反转
录!
3. 体系配制:注意避光!首先口罩戴起，头发扎好;每个样品设置 3 个平行孔，保
证数据真实可用;反转录时可能同一样本核酸有多个小 EP 管分装,建议配体系
时尽量转移- -个管中匀后加样，保证平行孔间数据稳定;没有排枪的小伙伴们
加样只要手法稳定也是能保证结果的。(建议新手们提前在实验记录本上规划好加
样安排，操作时不易出错，整理数据时也清晰明了。)
4. 上机操作:上机前首先离心， 如果管内有"顽固”气泡可以用手指轻轻弹就能
剩余10页未读，继续阅读
江南素雪
- 粉丝: 16
- 资源: 1
评论0