论文研究 - 由TALEN介导的内源组蛋白甲基转移酶DOT1L的FLAG标签

包括H3赖氨酸79甲基化（H3K79me）在内的组蛋白修饰在基因转录和DNA损伤修复中起着关键作用。 DOT1L是H3K79me三种状态的唯一甲基转移酶，与白血病，大肠癌和扩张型心肌病有关。 但是，由于难以使用DOT1L蛋白，因此在这些途径和疾病发病机理中对DOT1L和H3K79me的了解受到限制。 例如，基于染色质免疫沉淀（ChIP）的方法揭示的DOT1L的基因座特异性或全基因组结合位点是推断其功能所必需的，但是目前尚无法获得高质量的ChIP级抗体。 在本文中，我们已经开发出一种敲入方法来标记内源DOT1L的C末端结构域具有3×Flag，以进行功能分析。 通过使用TALENs在内源性DOTIL上诱导靶向的双链断裂来刺激该位点的局部同源重组，可以促进敲入。 分离成功敲入的单细胞集落并通过不同方法进行验证。 我们还证明了标记的DOT1L在甲基化方面保持了其正常功能，工程细胞对于进一步研究将非常有用。